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内毒素检测的原理:凝胶法

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本文介绍了内毒素检测中凝胶法的原理、操作步骤和结果判定方法。凝胶法利用鲎试剂与细菌内毒素的凝集反应,通过定性(凝胶限度实验)和半定量两种方式检测内毒素含量,并详细说明了阳性、阴性对照设置及结果判定标准。

📋 核心要点

📖 详细内容

鲎试剂是从鲎的血液中提取的冻干试剂。凝胶法是运用鲎试剂会与细菌内毒素发生凝集反应这一特性来判断供试品中内毒素含量的方法。反应的速度以及反应终点时凝胶的坚固程度与内毒素的浓度有关。药典收录了定性以及半定量的两种凝胶法。前者又名凝胶限度实验,通过将供试品溶液与加入内毒素标准品的供试品溶液/检查用水的阳性对照以及未加入内毒素的检查用水阴性对照反应结果相比较来定性地判断供试品是否符合规定(即是否含有内毒素)。凝胶半定量实验则是在完成内毒素标准品的灵敏度复核试验及供试品干扰试验后将供试品溶液梯度稀释,将每一稀释系列中阳性结果平行管的稀释倍数乘以鲎试剂的灵敏度浓度,为每个系列的反应终点浓度。如果检验的是经稀释的供试品,则将终点浓度乘以供试品进行半定量试验的初始稀释倍数,即得到每一系列内毒素浓度。每⼀系列内毒素浓度的几何平均值即为供试品溶液的内毒素浓度。若每一系列内毒素浓度均小于规定的限值,判定供试品符合规定。

凝胶法结果判定方法:将试管从恒温器中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内形成凝胶,并且凝胶不变形、不从管壁滑脱者为阳性;未形成凝胶或形成的凝胶不坚实、变形并从管壁滑脱者为阴性。保温和拿取试管过程应避免受到振动,造成假阴性结果。

❓ 常见问题

Q: 凝胶法如何判定内毒素检测结果?
A: 将试管从恒温器中取出,缓缓倒转180°,若管内形成凝胶且凝胶不变形、不从管壁滑脱,则为阳性;未形成凝胶或凝胶不坚实、变形、从管壁滑脱,则为阴性。操作中应避免振动,防止假阴性。
Q: 凝胶半定量实验如何计算内毒素浓度?
A: 将供试品溶液梯度稀释,每个稀释系列中阳性结果平行管的稀释倍数乘以鲎试剂的灵敏度浓度,得到每个系列的反应终点浓度。若检验的是稀释供试品,则将终点浓度乘以初始稀释倍数,得到每个系列的内毒素浓度,再取几何平均值作为供试品溶液的内毒素浓度。

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