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常见菌落总数的操作方法

微生物检验 菌落总数 菌落总数平皿法薄膜过滤法MPN法培养条件计数规则
本文系统介绍了菌落总数的常用操作方法,包括平皿法、薄膜过滤法和MPN法,并详细列出了不同标准下的取样量、稀释液、培养条件及计数规则。强调根据样品特性和污染度选择合适方法,并需通过方法学验证确保结果准确性。

📋 核心要点

📖 详细内容

菌落计数方法包括平皿法、薄膜过滤法和最可能数法(Most-Probable-Number Method,简称MPN法),其中平皿法可分为倾注平皿法和涂布平皿法,常见的菌落总数操作方法见表1。

GB4789.2-2022 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

倾注平皿法/菌落总数测试片

FDA- Bacteriological Analytical Manual Chapter 3:2001《Aerobic Plate Count》

GB/T13093-2006 《饲料中细菌总数的测定》

GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物检验方法 细菌总数测定》

GB/T5750.12—2023《生化饮用水标准检验方法 微生物指标》

WS 394-2012 《公共场所集中空调通风系统卫生规范 附录D 集中空调送风中细菌总数检验方法》

六级筛孔撞击式微生物采样器

GB15979-2002 《一次性使用卫生用品卫生标准 附录B2》

《化妆品安全技术规范》2015版

BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》

USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS: MICROBIAL ENUMERATION TESTS》

平皿法/薄膜过滤法/MPN法

BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-sterile Products》

EP 9.0 edition, Chapter 2.6.12《Microbiological examination of non-sterile products: microbial enumeration tests》

ChP1105 2020版《非无菌产品微生物限度检查:微生物限度计数》

根据上表的适用范围和操作方法可得出,平皿法是使用范围最广。

根据测试标准适用范围和样品特性:

A.平皿法因可操作性性强,会更多用于污染度高的被检样品;

B.薄膜过滤法适用于测试量需求大且污染度一般的液体样品;

C.MPN法可用于微生物计数时精确度较差时,包括对于某些微生物污染度很小的样品。

故在日常测试中,可根据样品的污染度情况去选择更合适的菌落总数测试操作方法。

样品的取样量与其质量标准或测试方法去选择,对于官方标准未明确取样量的,亦可根据结果的代表性加大取样量。稀释缓冲液的选择则是要求样品在稀释缓冲液中能够充分混合,从而保证样品的均一性,故不同样品,会有不同的稀释液需求。日常工作中,常见的稀释缓冲液与要求见表2。

GB4789.2-2022 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

无菌生理盐水/磷酸盐缓冲液

FDA- Bacteriological Analytical Manual Chapter 3:2001《Aerobic Plate Count》

GB/T13093-2006 《饲料中细菌总数的测定》

0.85%生理盐水/磷酸盐缓冲液

GB/T18204.9-2000 《游泳池水微生物检验方法 细菌总数测定》

GB/T5750.12—2023《生化饮用水标准检验方法 微生物指标》

WS 394-2012 《公共场所集中空调通风系统卫生规范 附录D 集中空调送风中细菌总数检验方法》

28.3L/min,(5-15)min

GB15979-2002 《一次性使用卫生用品卫生标准 附录B2》

无菌生理盐水(200mL)

不进行梯度稀释,做5平行

《化妆品安全技术规范》2015版

无法充分溶解稀释液中的样品可加吐温80和/或石蜡

BS EN ISO 21149 (2017) 《Cosmetics- Microbiology -Enumeration and detection of aerobic mesophilic bacteria》

1:10(样品:加稀释液后)

无菌生理盐水、磷酸盐缓冲液、pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液等

最终的取样量与稀释液,需通过样品方法学适用性验证方能使用。

USP-NF 61 《MICROBIOLOGICAL EXAMINATION OF NONSTERILE PRODUCTS:MICROBIAL ENUMERATION TESTS》

BP Appendix XVI B 《Microbiological Examination of Non-steri

❓ 常见问题

Q: 菌落总数测定中,平皿法、薄膜过滤法和MPN法分别适用于哪些样品?
A: 平皿法适用于污染度高的样品,操作性强;薄膜过滤法适用于测试量大且污染度一般的液体样品;MPN法适用于微生物污染度很小的样品,但精确度较差。
Q: 菌落总数计数时,如何报告结果?
A: 菌落计数以CFU报告。100cfu以内报整数,超过100cfu取两位有效数字,超过300cfu报告TNTC(多不可数)。不同标准可能有细微差异,如FDA规定<25cfu报告实际值或<25,>250cfu报告>250或TNTC。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-13 至 2026-07-04),共检出 672 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
菌落总数 ×672
典型案例
兰州牛肉面 — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
道地肠(原味) — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
即食海蜇 — 菌落总数:1.4×10⁵;<10;<10;1.3×10⁵;1.4×10⁵CFU/g(标准 n=5,c=2,m=5×10⁴,M=10⁵CFU/g,不合格)(陕西省) 2026-07-01
省份分布:重庆市(104条)、珠海市(94条)、福建省(84条)、甘肃省(64条)、河南省(54条)
📊 查看完整抽检数据分析 →
数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

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