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菌落计数的基本步骤

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本文详细介绍了菌落计数的基本步骤,包括固体和半固体样品的稀释制备、10倍递增稀释、平板倾注、培养条件(36℃±1℃/48h±2h,水产品30℃±1℃/72h±3h)、菌落计数原则(选取30CFU-300CFU平板)及结果报告方式(CFU/g或CFU/mL)。

📋 核心要点

📖 详细内容

3、结果与报告二、具体过程

(1)固体和半固体样品

称取25g置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min10000r/min均质1min2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min2min,制成1:10的样品匀液。

以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1:10的样品匀液。

上步完成后,用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1:100的样品匀液。

根据对样品污染状况的估计,选择1个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。

之后,及时将15mL~20mL冷却至48℃的平板计数琼脂培养基(可放置于48℃±2℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。

移液过程使用的器具,都应避免微生物污染。使用耐高压移液枪,核查洗耳球无菌程度,避免移液枪触及均质袋或试管内壁……

样品匀液完成后,可按相同操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。

样品稀释完成后,就要进行培养和菌落计数了。

待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1℃培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h

如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按相同条件进行培养。

培养完成后,就要进行菌落计数了,计数可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units,CFU)表示。

选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。

当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

为了生成结果和报告,需要根据计数结果和公式计算出菌落总数。需要注意的是,对于菌落数量不同的培养皿,计数原则有所不同。

若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。

称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。

❓ 常见问题

Q: 菌落计数时如何选取有效平板?
A: 选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
Q: 样品稀释过程中如何避免污染?
A: 移液过程使用的器具都应避免微生物污染,使用耐高压移液枪,核查洗耳球无菌程度,避免移液枪触及均质袋或试管内壁。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-13 至 2026-07-04),共检出 672 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
菌落总数 ×672
典型案例
兰州牛肉面 — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
道地肠(原味) — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
即食海蜇 — 菌落总数:1.4×10⁵;<10;<10;1.3×10⁵;1.4×10⁵CFU/g(标准 n=5,c=2,m=5×10⁴,M=10⁵CFU/g,不合格)(陕西省) 2026-07-01
省份分布:重庆市(104条)、珠海市(94条)、福建省(84条)、甘肃省(64条)、河南省(54条)
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数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

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