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食品中大肠菌群&amp金黄色葡萄球菌检测时常见的问题及原因解析

微生物检验 菌落总数/大肠菌群/金黄色葡萄球菌 大肠菌群金黄色葡萄球菌微生物检测GB 4789.3GB 4789.10MPN法
本文解析了食品中大肠菌群和金黄色葡萄球菌检测的常见问题及原因,包括培养基气泡、颜色异常、菌落特征辨认等,并提供了解决方法。同时介绍了相关检测标准和方法,如GB 4789.3-2016、GB 4789.10-2016等。

📋 核心要点

📖 详细内容

大肠菌群:是指一群能发酵乳糖、产酸、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏无芽孢杆菌 。该菌主要来源于人畜粪便,大肠菌群是评价食品卫生质量的重要指标之一。

目前,食品中大肠菌群检测方法国内主要采用GB 4789.3-2016和GB/T4789.3-2003标准、进出口企业采用的ISO方法或者客户提供的检测方法等。

目前国内的GB/T 4789.3-2003标准:采用三步法,即:乳糖发酵试验、分离培养和证实试验;而GB 4789.3-2016标准,采用两步法,即:发酵推测实验、证实实验。

检测该菌的方法主要有MPN法,平板计数法。

MPN法中主要用到的是LST、BGLB、EC肉汤等。

平板计数法主要是VRBA、去氧胆酸盐等。

1、 LST、BGLB、EC等在灭菌时小倒管中气泡排不尽;

2、灭菌后培养基颜色异常;

3、灭菌后培养基出现沉淀;

4、培养后气泡不易观察;

5、VRBA、去氧胆酸盐平板上菌落特征不易辨认;

6、平板法培养基不凝固等。

1、在分装LST、BGLB、EC时,小倒管中有水柱;此外,高压灭菌时,需急排气,灭菌后迅速冷却。

2、在制备过程中过度加热;水质不佳(GB/T 2740-2008标准中5.4.2.5中强调实验室培养基、试剂及稀释剂配制用水应经蒸馏、去离子或反渗透处理,电阻率在25℃时应≥300 000 n.cm,建议每周检测一次);或者脱水培养基质量差。

3、在发酵试验工作中,经常可以看到在发酵倒管内极微少的气泡(有时比小米粒还小),有时可以遇到在初发酵时产酸或沿管壁有缓缓上浮的小气泡。实验表明,大肠菌群的产气量,多者可以使发酵倒管全部充满气体,少者可以产生比小米粒还小的气泡。如果对产酸但未产气的乳糖发酵如有疑问时,观察气泡时,可以用手轻轻打动试管,如有气泡沿管壁上浮,即应考虑可能有气体产生,然后作进一步试验。

4、熟悉大肠菌群在上述平板上的特征,必要可做一些阳性的对照。有些食物残渣会影响观察结果,这样需要我们在培养前仔细观察平板的状态,大的食物残渣可以做一些标记。

5、一般是在制备过程中称量不正确、或者培养基制备后未充分混匀。

金黄色葡萄球菌:是人类化脓感染中最常见的病原菌,可引起局部化脓感染,也可引起肺炎、败血症等,其毒性的强弱取决于产生的毒素和侵袭性酶,例溶血素酶、杀白细胞素、血浆凝固酶、脱氧核糖核酸酶。

我国国家卫生和计划生育委员会于 2021年9月发布了《食品安全国家标准 食品中致病菌限量》(GB 29921-2021),在国标中制定了金黄色葡萄球菌的限量标准,规定肉制品、粮食制品、即食豆制品、即食果蔬、即食调味品等7大类食品中,同批次采集 5 份样品,每份样品中的金黄色葡萄球菌浓度均不得超出 1000 CFU/g,仅允许其中1份样品在 100~1000 CFU/g之间。

新版标准中还增加了乳制品中金黄色葡萄球菌的限量要求。

目前,国内检测食品中金黄色葡萄球菌依据国家标准《食品微生物学检验 金黄色葡萄球菌检验》(GB4789.10-2016)检测该菌的方法主要有MPN法,平板计数法;主要用到的是7.5%氯化钠肉汤、Baird-Parker平板,血平板等。

B-P琼脂上金黄色葡萄球菌有黑色的菌落中心,周围有半透明的卵磷脂沉淀环。金黄色葡萄球菌在B-P上的菌落特征如下图:

1、7.5%氯化钠肉汤中呈混浊生长,怎么判断;

2、平板的状态:透明、有絮状物。

3、凝固酶实验的观察。

1、由于食品颗粒的影响,这步不容易观察,最好是进行下一步验证。

2、不同的厂家的培养基平板制好后的状态有所不同,主要取决于亚碲酸钾卵黄增菌液的不同。根据各厂家的培养基说明制定相应的实验室SOP.

3、在添加亚碲酸钾卵黄增菌液时,温度的掌握,不宜太高,过高易使卵黄变性,也不应太低,太低琼脂易凝固。

4、将金黄色葡萄球菌接种到兔血浆上后,每半小时观察一次,观察凝固时,将血浆轻轻倾斜或慢慢倒置,如有流动,既证明没有凝固。不同厂家的冻兔血浆,可能会有差异,仔细阅读作业指导书。

❓ 常见问题

Q: 大肠菌群检测中LST培养基灭菌后小倒管气泡排不尽怎么办?
A: 分装LST、BGLB、EC时,小倒管中可能有水柱;高压灭菌时需急排气,灭菌后迅速冷却,以减少气泡残留。
Q: 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker平板上的菌落特征是什么?
A: 金黄色葡萄球菌在B-P琼脂上菌落呈黑色,中心有黑色,周围有半透明的卵磷脂沉淀环。
Q: GB 29921-2021对金黄色葡萄球菌的限量要求是什么?
A: 规定肉制品、粮食制品等7大类食品中,同批次采集5份样品,每份样品中金黄色葡萄球菌浓度均不得超出1000 CFU/g,仅允许1份样品在100~1000 CFU/g之间。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-03 至 2026-07-04),共检出 1743 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
大肠菌群 ×984菌落总数 ×672金黄色葡萄球菌 ×87
典型案例
兰州牛肉面 — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
道地肠(原味) — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
幺贵麻辣脆(鲜切马铃薯片) — 大肠菌群:420CFU/g; <10CFU/g; <10CFU/g; 500CFU/g; <10CFU/g(标准 n=5,c=2,m=10CFU/g, M=102CFU/g; 菌落总数,严重超标)(未知) 2026-07-03
省份分布:重庆市(333条)、珠海市(276条)、福建省(226条)、河南省(149条)、黑龙江省(101条)
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数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

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