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致病菌常见问题解答

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本文以问答形式解答了致病菌检测中的常见问题,包括分离划线方法、选择性平板判断、培养基pH测定、血清学鉴定、生化鉴定浊度要求、三糖铁斜面变黑原因、BPW增菌温度、阪崎肠杆菌检测细节、乳粉检验培养基选择、温度作用、万古霉素使用、复检问题及无氧环境对阪崎肠杆菌的影响等。

📋 核心要点

📖 详细内容

关于分离平板如何分离划线?

分离平板划线最好采用分区划线的方法,目的是将不同菌分离开,便于后续挑取单菌落鉴定。根据增菌液浓度决定不同区之间是否需要烧环或者更换接种环,保证菌落不会过密集或者过于稀疏。

选择性分离平板上有的不长菌,有的有典型菌落,如何判断?

标准中为了避免漏检,选用了两种或两种以上的选择性分离平板。由于不同种类的沙门在平板上生长有差异,所以某些沙门氏菌会出现在某一种平板上生长,其他平板不生长或者生长不典型的情况。根据标准,任何一种分离平板上出现可疑菌落都需要进行后续的鉴定,不能直接判定。根据后续生化和血清结果再报告检出或者未检出。

培养基灭菌前后如何测定pH?

培养基pH值测定是完全溶解,灭菌后,冷却至25℃进行测量。我司不推荐灭菌前测定,因为灭菌过程中,温度和成分间的化学反应,会影响pH值。所以,推荐客户灭菌冷却后测量。如果是含琼脂的培养基可以采用固体电极进行测量。

血清学鉴定时H血清鉴定使用的半固体琼脂配置及挑菌问题

转接半固体培养后,由于琼脂含量低、平板软,所以建议采用一次性接种环轻轻刮取扩散边缘菌苔进行后续操作。金属接种环质地坚硬容易戳破琼脂。

血清学鉴定是否需要做分型?

按照标准要求报告结果只需报告检出或未检出沙门氏菌,不需要报告具体血清型,所以只需要做O多价和H多价就可以了。如果需要后续进行分型,需要购买群血清及单因子血清。

生化鉴定使用的菌悬液浊度要求?

生化鉴定套装为微量鉴定系统,对于菌悬液浓度有要求。使用0.5M浊度进行接种。菌悬液浓度过大或者过小对实验结果的准确度有影响。

鼠伤寒沙门氏菌接种三糖铁琼脂斜面变黑的问题?

可能是由于接种量过大或者培养时间过长导致的,建议减少接菌量或缩短培养时间。

BPW在增菌时必需加热到44℃吗?室温的温度可以增菌吗?

培养基预热至44℃主要目的是保证乳粉的充分溶解,室温条件下加入样品可能会导致部分样品聚集成团,不易溶解。

TSA平板上的可疑菌落没有产黄色素也有可能是阪崎吗?为什么TSA要25℃培养?

不同克罗诺杆菌的产黄色素能力不同,并且有文献报道约10%的克罗诺菌属的菌株不具有产黄色素的能力,所以仅根据产黄色素进行判定会有漏检的情况,建议结合生化试验进行判断。在25℃时更易观察黄色素的产生,温度过高黄色素颜色会变淡(出自《伯杰氏细菌手册》)。

怎么控制0.5麦氏浊度呢?

根据我们生化干制套装中提供的0.5麦氏浊度比浊管作为参比,也可以选用浊度仪。

为什么用同一株标准菌株 ATCC29544 做阳性添加后做阪崎干制时西蒙氏柠檬酸有阴性也有阳性?

如果操作正确,保证菌株活性及纯度的情况下,ATCC29544 这株模式菌株的西蒙氏柠檬酸盐反应应该呈现阳性。

乳粉检验中用哪一种显色培养基好?如何选择?

ESM015可以进行准确的筛选,相比较而言ESM016 培养基上生长的菌株特异性更强,结果更易观察。

为什么这么多温度呢?不同温度的作用能明确吗?

不同过程的温度的作用是不一样的。BPW进行36±1℃,主要是为了使得产品中的微生物进行复苏;选择性增菌44±0.5℃是为了提高选择性;TSA 25℃利于黄色素的产生;生化试验30℃是为了提供适宜的温度更利于目标菌的生长并观察生化反应。

ESM015培养基对阴沟肠杆菌的选择性效果?

目前我们实验室的阴沟肠杆菌标准菌株在ESM015上为白色菌落,但是1%的阴沟肠杆菌是具有α-葡萄糖苷酶的活性,所以极少的阴沟肠杆菌也会呈现蓝绿色菌落。

请问两种检测方法该如何选择呢?

根据限量标准进行选择,目前限量标准中要求一段奶粉进行定量检测。

在检测过程中阳性对照用ATCC29544 那有阴性对照吗 ?

阴性对照试验不用全过程添加,只需在部分生化实验时添加阴性对照菌株。

万古霉素的添加可以不过滤吗?

我公司成品万古霉素已经过过滤除菌,可直接使用,如果自行配制建议进行过滤除菌。

阪崎肠杆菌检出,可以原样复检吗?原样复检咋又检不出了?

由于微生物的数量和分布不均匀导致,微生物不能复检。

自立袋封上后是否制造了无氧环境?阪崎肠杆菌还能很好的生长吗?

自立袋的封口不会造成无氧环境,阪崎肠杆菌能够正常生长。

培养基高压前进行煮沸即可避免黑色沉淀的产生。

❓ 常见问题

Q: 选择性分离平板上有的不长菌,有的有典型菌落,如何判断?
A: 标准中为避免漏检,选用两种或以上选择性分离平板。不同沙门氏菌在平板上生长有差异,某些菌可能在某一种平板上生长,其他不生长或生长不典型。根据标准,任何分离平板上出现可疑菌落均需进行后续鉴定,不能直接判定,需根据生化和血清结果报告检出或未检出。
Q: 血清学鉴定是否需要做分型?
A: 按照标准要求,报告结果只需报告检出或未检出沙门氏菌,不需要报告具体血清型,因此只需做O多价和H多价血清学鉴定。如果需要后续分型,需购买群血清及单因子血清。
Q: 乳粉检验中用哪一种显色培养基好?如何选择?
A: ESM015培养基可进行准确筛选,而ESM016培养基上生长的菌株特异性更强,结果更易观察。选择时可根据具体需求:若需广泛筛选可选ESM015,若需高特异性可选ESM016。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-30 至 2026-07-01),共检出 90 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
沙门氏菌 ×90
典型案例
风干鸡胸肉(五香味) — 沙门氏菌:检出,未检出,未检出,检出,检出(标准 n=5,c=0,m=0,不合格)(陕西省) 2026-07-01
五香粉 — 沙门氏菌:未检出;检出;未检出;未检出;未检出(标准 n=5,c=0,m=0,不合格)(陕西省) 2026-04-16
红牛维生素功能饮料 — 沙门氏菌:(标准 ,不合格)(重庆市) 2025-12-31
省份分布:珠海市(74条)、重庆市(14条)、陕西省(2条)
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数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

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