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菌落总数检测及新手棘手问题

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本文详细介绍了菌落总数检测的标准方法(GB 4789.2-2016和GB/T 5750.12-2006),包括培养基区别、操作要点、计数规则、常见问题及解答,特别针对新手在菌落计数、空白污染、稀释均匀性等方面的困惑提供了实用指导。

📋 核心要点

📖 详细内容

食品企业一般会用到的两个做菌落总数的标准。(当然还有其他标准)

GB 4789.2-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定》

GB-T5750.12-2006 《生活饮用水标准检验方法微生物指标》

以这两个标准来说,它们的检测方法是差不多,主要区别在于培养基的不同和样品的状态不同(食品中有固态和液态,生活饮用水只有液态)。食品的培养基是使用PCA,生产用水的使用NA。

PCA(平板计数琼脂培养基)

胰蛋白胨 5.0g

酵母浸膏 2.5g

葡萄糖 1.0g

琼脂 15.0g

蒸馏水 1000mL

注:胰蛋白胨提供碳源和氮源;酵母浸粉提供B族维生素;葡萄糖提供能源;琼脂是培养基的凝固剂。

蛋白胨 10g

牛肉膏 3g

氯化钠 5g

琼脂 14g(标准10g-20g)

蒸馏水 1000mL

注:蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源;氯化钠能维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂。

1 菌落总数是比较常规的微生物检测项目,也是比较容易做的一个微生物检测方法,主要注意无菌操作,与稀释液均匀性。

2 在空白出现菌落的时候需要去分析哪一步出现问题,人机料法环。当然空白出现菌落的时候,那么该批次的菌落总数数据都作废处理。在制样和做样的时候需要在百级的环境(百级的洁净工作台)下进行。

3 稀释液的均匀性,这个会影响结果,刚开始的时候可能会造成同一梯度的两个结果相差有点远,这个是因为做的时候没有把稀释液均匀。如果前后两个梯度没有梯度性,那么就是在做稀释做不好。这个都是靠多做,技术才会提高。(当然还有一种情况,样品是中添加了抑菌物质,这样没有梯度性。)

1 可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits , CFU )表示。

2 选取菌落数在 30CFU~300CFU 之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于 30CFU的平板记录具体菌落数,大于 300CFU 的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。

3 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。(这个是很多新手会问的一个问题)

4 当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。

1 若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每 g ( mL )样品中菌落总数结果。

2 若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式( 1 )计算:

3 若所有稀释度的平板上菌落数均大于 300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。

4 若所有稀释度的平板菌落数均小于 30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

5 若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于 1 乘以最低稀释倍数计算。

6 若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时,则以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落数乘以稀释倍数计算。

1.有新人可能会拿着菌落总数的平板去问别人这是什么菌?

答:这是看不出来的,菌落总数只能检测出样品卫生情况,一个样品的细菌数量,不能验证出什么菌。这是一个不应该犯的误区。

2.若所有稀释度的平板菌落数均不在 30CFU~300CFU 之间,其中一部分小于 30CFU 或大于300CFU 时。就会有人不知道怎么去判定那个梯度更接近30-300。

举例:一个梯度:28/28;另梯度:305/305,那么那个数据更接近呢?

两个方法(网友提供):

a、按标准字面意思直接做差比较后再乘以稀释倍数:28-30=-2,他们相差2;305-300=5,他们相差5。2比5要小,那么采取28相应的梯度再乘以稀释倍数;

b、恢复为同稀释度做差比较:把两个梯度换算成同一个梯度,一般把28换算成280。280-300=-20,相差20;305-300=5,相差5。20比5要大,那么采取305相应的梯度。

(个人意见:我是更偏向于第二种,因为要在同一个梯度上做比较才能体现出数据的可靠性,同时我偏向采用前一个梯度的数字,那么这个数值可以减少一步步骤带

❓ 常见问题

Q: 菌落总数检测中,如何区分样品颗粒和菌落?
A: 有两种方法:1)在培养基中添加TTC(2%浓度1mL加到400mL培养基中),TTC与活细胞线粒体内的琥珀酸脱氢酶反应生成红色甲月赞,使菌落变红;2)4℃冷藏保存一个样品和培养基混匀的平板做对照,观察菌落形态特征。
Q: 菌落总数计数时,如果所有稀释度平板菌落数都不在30-300CFU之间,如何选择最接近的梯度?
A: 有两种方法:a)直接做差比较后乘以稀释倍数,如28与30差2,305与300差5,取28对应梯度;b)恢复为同稀释度做差比较,如28换算为280,与300差20,305与300差5,取305对应梯度。个人意见更偏向第二种,但需根据标准灵活处理。
Q: 菌落总数检测中,培养基出现干裂怎么办?
A: 干裂是由于培养基水分缺失导致。需检查培养箱温度是否稳定、培养基是否倒得太薄(一般倒15-20mL)、平皿叠放是否通风(每叠不超过6个,留间隙)。干裂严重时结果无效,需排查原因避免再次发生。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-13 至 2026-07-04),共检出 672 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
菌落总数 ×672
典型案例
兰州牛肉面 — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
道地肠(原味) — 菌落总数:(标准 n=5,c=2,m=104CFU/g,M=105CFU/g,不合格) 2026-07-04
即食海蜇 — 菌落总数:1.4×10⁵;<10;<10;1.3×10⁵;1.4×10⁵CFU/g(标准 n=5,c=2,m=5×10⁴,M=10⁵CFU/g,不合格)(陕西省) 2026-07-01
省份分布:重庆市(104条)、珠海市(94条)、福建省(84条)、甘肃省(64条)、河南省(54条)
📊 查看完整抽检数据分析 →
数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

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