食安寻FoodSeek

食品中金黄色葡萄球菌(定量)检测的能力验证

微生物检验 金黄色葡萄球菌检测 金黄色葡萄球菌能力验证定量检测B-P平板涂布法溶血试验
本文介绍了食品中金黄色葡萄球菌定量检测的能力验证流程,包括样品准备、活化、稀释、涂布、培养及确认试验(溶血、血浆凝固酶),强调了操作细节如平板制作、梯度稀释和涂布技巧对结果准确性的影响。

📋 核心要点

📖 详细内容

开展能力验证试验是检验实验室检测能力和提高检测水平的重要手段。利用实验室间的比对,对实验室的校准或检验工作进行判定。目的是为了实现确定某个实验室进行某些特定检测或测量能力,以及监控实验室的持续能力。

1、前期做好充足的准备工作,根据国家标准,尽可能制定一个检验检测的方案,以便保证结果的准确性。

2、样品来源:2瓶不同的真空西林瓶装白色冻干粉末样品

样品储存:-15℃以下冷冻保存

样品活化步骤(建议):-20℃~ 4℃(30min),然后室温(30min),接着样品再水化(尽量减少大范围温度变化对待测样品的影响)。

样品再水化:一般能力验证样品以国体粉末形式发放,以液体(CFU/mL)形式出报告。样品再水化前一定要认真、仔细阅读作业指导书,无特殊规定,本次水化后的样品40mL为待测原液。

4、方法选择国标第二法

5、B-P平板计数(20 CFU ~200 CFU)

(1)1号样品:37℃,培养48h

100稀释(接种量0.3mL,0.3mL,0.4mL)

1000倍稀释(接种量0.3mL,0.3mL,0.4mL)

(2)2号样品:37℃,培养48h

10稀释(接种量0.3mL,0.3mL,0.4mL)

100稀释(接种量0.3mL,0.3mL,0.4mL)

平板涂布不是很好,有少部分菌落跑到了平板边缘处,对于计数会有些影响。大家在该操作过程中涂布棒尽量不要接触平板边缘。

a.B-P琼脂平板制作:尽量在试验前一天制作好,当天制作平板得出的结果与之相差较大,原因可能是平板涂布时没有完全干燥导致的。

b.梯度稀释(25mL+225mL):是关键步骤,必须尽可能地减少误差(新手建议涡旋混匀,涡旋时间不宜过长,长时间离心力等作用下,微生物细胞可能死亡)。

c.涂布:尽可能涂布均匀,不要接触平板边缘,避免菌落叠在一起,而导致无法计数。

6、血平板(溶血观察)

(1)1号样品溶血情况(正反面)挑取平板5个菌落进行试验(只列出前三个菌落结果)

(2)2号样品溶血情况(正反面,只列出前三个菌落结果)

7、血浆凝固酶试验

(1)营养琼脂斜面和BHI肉汤

(2)血浆凝固酶试验(冻干兔血浆:青岛海博)

❓ 常见问题

Q: 金黄色葡萄球菌定量检测能力验证中,样品如何活化?
A: 样品为冻干粉末,需在-20℃~4℃放置30分钟,再室温放置30分钟,然后进行再水化,以减少温度变化对样品的影响。
Q: B-P平板计数时,为什么建议提前一天制作平板?
A: 当天制作的平板可能未完全干燥,涂布时菌落易扩散或重叠,影响计数准确性。提前一天制作可确保平板充分干燥。
Q: 梯度稀释时涡旋混匀需要注意什么?
A: 涡旋时间不宜过长,否则长时间离心力可能导致微生物细胞死亡,影响计数结果。

📊 抽检实况

基于全国食品安全监督抽检数据(2023-01-30 至 2025-12-31),共检出 87 条不合格通报。

不合格检测项 TOP 5
金黄色葡萄球菌 ×87
典型案例
红牛维生素功能饮料 — 金黄色葡萄球菌:(标准 ,不合格)(重庆市) 2025-12-31
大溪地诺丽加蓝莓果汁 — 金黄色葡萄球菌:(标准 ,不合格)(重庆市) 2025-12-31
太极牌番茄红素维生素E软胶囊 — 金黄色葡萄球菌:(标准 ,不合格)(重庆市) 2025-12-31
省份分布:珠海市(74条)、重庆市(13条)
📊 查看完整抽检数据分析 →
数据来源:全国食品安全监督抽检公告 · 自动关联

📎 相关文章