第一法适用于以粮食和其副产品豆饼,麸皮等为原料酿造或配制的酱油,以粮食为原料酿造的酱类,以黄豆,小麦粉为原料酿造的豆酱类食品中氨基酸态氨的测定;第二法适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油中氨基酸态氮的测定。
利用氨基酸的两性作用,加人甲醛以固定氨基的碱性,使羧基显示出酸性。用氢氧化钠标准溶液滴定后定量,以酸度计测定终点。
除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯,水为GB/T 6682规定的三级水。
甲醛(36%~ 38%):应不含有聚合物(没有沉淀且溶液不分层)。
邻苯二甲酸氢钾:基准物质。
氢氧化钠标准滴定溶液[c(NaOH)-0.050mol/L]:经国家认证并授子标准物质证书的标准滴定溶液或配制方法如下:
a)酚酞指示液:称取酚酞1 g溶于95%的乙醇中,用95%乙醇稀释至100 ml。
b)氢氧化钠溶液[氯氧化钠标准滴定溶液c(NaOH)=0.05 mol/L]:称取 110 g氢氧化钠于250mL的烧杯中,加100ml的水,振摇使之溶解成饱和溶液,冷却后置于聚乙烯的塑料瓶中,密塞.放置数H ,澄清后备用。取上层清液2.7 mL加适量新煮沸过的冷蒸馏水至1 000 mL,摇匀。
c)氢氧化钠标准滴定溶液的标定:准确称取约0.36 g在105℃~110℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾,加80 mL新煮沸过的水,使之尽量溶解,加2滴酚酞指示液(10 g/L),用氢氧化钠溶液滴定至溶液呈微红色,30 s不褪色。记下耗用氢氧化钠溶液毫升数。同时做空白试验。
c-氢氧化钠标准滴定溶液的实际浓度。单位为摩尔每升(mol/L);
m-基准邻苯二甲酸氢钾的质量。单位为克(g);
V1-氯氧化钠标准溶液的用量体积。单位为毫升(mL);
V2-空白实验中氢氧化钠标准溶液的用量体积。单位为毫升(mL);
0.2042--与1.00 ml.氢氧化钠标准滴定溶液[e(NaOH)= 1.000 mol/L]相当的基准邻苯二甲酸氢钾的质量。单位为克(g)。
酸度计(附磁 力搅拌器)。
10 ml微量破式滴定管。
分析天平:感量0.1 mg。
称量5.0g试样于50mL的烧杯中,用水分数次洗入100mL容量瓶中,加水至刻度,混匀后吸取20.0mL,置于200 ml烧杯中,加60 mL水,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准溶液[e(NaOH)=0.050 mol/L3}滴定至酸度计指示pH为8.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数,可计算总酸含量。加入10.0 mL甲醛溶液,混匀。再用氯氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH为9.2,记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数。同时取80 ml水。先用氢氧化钠标准溶液[e(NaOH)= 0.050 mol/L]调节至pH为8.2,再加人10.0 mL甲醛溶液.用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH为9.2,做试剂空白试验。
将酱或黄豆酱样品搅拌均匀后,放入研钵中,在10min内迅速研磨至无肉眼可见颗粒,装人磨口瓶中备用。用已知重量的称量瓶称取搅拌均匀的样品5.0g用50mL80℃左右的燕馏水分数次洗入100ml.烧杯中,冷却后,转人100ml容量瓶中,用少量水分次洗涤烧杯洗液并入容量瓶中并加水至刻度混匀后过能。吸取滤液10.0 mL置于200 ml烧杯中,加60 mL水,开动磁力搅拌器,用氢氧化钠标准溶液[e(NaOH) = 0.050 mol/L]滴定至酸度计指示pH为8.2记下消耗氢氧化钠标准滴定溶液的毫升数,可计算总酸含量。加人10.0mL甲醛溶液混匀。再用氣氧化钠标准滴定溶液继续滴定至pH为9.2记下消耗氯氧化钠标准滴定溶液的毫升数。同时取80ml.水,先用氢氧化钠标准溶液[e(NaOH)=0.050mol/L]调节至pH为8.2再加入10.0ml甲醛溶液,用氢氧化钠标准滴定溶液滴定至pH为9.2做试剂空白试验。
试样中氨基酸态氨的含量按式(2)进行计算:
X一 试样中氨基酸态氮的含量,单位为克每百克(g/100 g);
V1一测定用试样稀释液加入甲醛后消耗氯氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL);
V2-试剂空白实验加入甲醛后消耗氢氧化钠标准滴定溶液的体积,单位为毫升(mL);
C-氢氧化钠标准滴定溶液的浓度,单位为摩尔每升(mol/L);
0.014--与1.00 ml氢氧化钠标准滴定溶液[<(NaOH)= 1.000 mol/L.]相当的氮的质量,单位为克(g);
m-称取试样的质量,单位为克(g);
V3一试样稀释液的取用量,单位为毫升(mL);
V4一试样稀释液的定容体积.单位为毫升(mL);
100一单位换算系数。
计算结果保留两位有效数字。
在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。